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高效液相色谱仪日常维护-新闻中心-液质联用仪|气相色谱仪|液相色谱仪|仪器维修维保|仪器租赁——谱质分析检测技术(上海)有限公司
高效液相色谱仪日常维护
发布时间:2022-03-05

高效液相色谱仪日常维护管理规程


具体维护内容

1.流动相

1.1溶剂瓶

a) 棕色玻璃瓶会避免藻类的生长,适用于盛放水及缓冲液相;

b) 流动相应经过0.45um或更小孔径的滤器过滤(Waters UPLC使用0.22μm滤膜过滤),以免其中微粒永久性阻塞毛细管,使用滤膜时区别使用有机膜与水膜。

1.2流动相效期的管理

a) 流动相为纯有机相的效期为1个月(长时间使用时注意溶液状态,使用前观察是否有絮状物,瓶体有无沉淀,下同);

b) 有机相比例≥50%,效期为3周;有机相比例为20%~50%效期为2周;有机相比例≤20%效期为1周(长时间使用时注意溶液状态);

c) 不含有机相的缓冲盐效期为3天

d) 纯化水当天配置、使用

1.3溶剂过滤器

Ⅰ溶剂过滤器检查方法

a) 拧开脱气机出口或比例阀入口管线,并使液面高于出口30cm此时溶剂会因为重力流出,脱气机或溶剂过滤头堵塞时,溶剂会流出不畅或不流出。

b) 查看过滤器是否变色。

c) 临时取下过滤器,检查柱前压力是否正常。


a) 玻璃滤头:将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下,先用水冲洗残留溶剂,然后将过滤器放在装有浓硝酸溶液(35%)的烧杯里浸一小时,纯水彻底冲洗过滤器。严禁使用超声波清洗机清洗,将过滤器重新装好,仅适用于Agilent液相。

b) 金属滤头:将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下,先用水冲洗残留溶剂,然后将过滤器放在50%异丙醇溶液的烧杯里超声清洗30分钟,再使用纯水超声清洗2次(每次20min),清洗后将过滤器重新装好,适用于Thermo Fisher、Shimadzu、Waters液相。

维护周期:建议每月清洗一次,长时间使用缓冲盐可适当提高清洗频率。

2.脱气机

2.1工作原理

真空脱气机由一个四通道真空箱和一个真空泵,压力传感器及控制电路构成。

溶剂瓶中的溶剂在泵的抽动下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。当溶剂经过真空管时,溶剂中溶解的气体将渗过塑料膜进入真空箱。到达真空脱气机出口时,溶剂几乎已被完全脱气而不含有任何气体。

2.1脱气机脱气状况判断方法

打开Purge阀(Waters UPLC可设置为灌注溶剂状态),设定泵的流速2ml/min,提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂过滤头,使之脱离液面一小段时间,此时溶剂传送管内会产生一小段气泡,放下过滤头,让此段气泡通过脱气机,如果脱气机正常,气泡应消失或缩小。

2.2清洗在线脱气机及比例阀方法

在长期使用水相或缓冲盐的通路,使用纯水冲洗后,再使用甲醇冲洗,可以打开Purge阀,使用5ml/min的流速(Waters UPLC可设置为灌注溶剂状态) 。污染比较严重时,可以使用异丙醇清洗。

3.四元/二元泵模块

3.1溶剂比例阀

3.1.1分类

Ⅰ)垂直式比例阀:垂直放置于四元泵中,如Agilent、Thermo Fisher液相。

Thermo Fisher U-3000溶剂比例阀

比例阀A、D通道位于上侧,B、C位于比例阀下侧。因此建议将A通道放入有机相多的溶剂中;B通道放入水相或缓冲液中;C通道放入纯有机相中,建议使用乙腈,作为冲洗溶剂;D通道固定放入10%乙腈水溶液中,作为置换溶剂及洗针和灌注注射器。

Agilent 1260溶剂比例阀

比例阀位置是A、D通道位于下侧,B、C位于比例阀上侧。因此建议将A通道放入水相或缓冲液中;B通道放入有机相多的溶剂;C通道放入纯有机相中,建议使用乙腈,作为冲洗溶剂;D放入10%乙腈水溶液中,作为置换溶剂。

Ⅱ)水平式比例阀:水平放置于四元泵中,如Waters,Shimadzu液相

水平式比例阀使用

建议通道使用情况与安捷伦一致,A通道放入水相或缓冲液中;B通道放入有机相多的溶剂;C通道放入纯有机相中,建议使用乙腈,作为冲洗溶剂;D放入10%乙腈水溶液中,作为置换溶剂。

Ⅲ)二元泵因只有两个通道,建议A通道放入水相或缓冲液中;B通道放入有机相多的溶剂。

3.1.2溶剂比例阀串液判断方法

使用两通连接系统,设定泵的流速1ml/min,每个通道各占25%流量,提起所有通道的溶剂过滤头,使之脱离液面一小段时间,此时溶剂传送管内会产生一小段气泡,放下过滤头,当气泡至管线中间位置时,关闭流速,在气泡处标记,只开其中一个通道流速观察其他三个通道气泡位置变化,若无变化,则该通道无串液问题,反之存在串液问题,同理检查其他通道是否存在问题。


幻灯片12


3.2柱塞密封清洗

a) 当泵头安装有清洗附件时,由于该附件中也有密封垫,这样就会增加活塞杆运动时的阻力,所以开泵前一定先用密封清洗液冲洗柱塞密封垫,湿润柱塞杆。

b) 建议使用10%异丙醇水溶液(或10%甲醇水溶液)作为密封清洗液,10%异丙醇水溶液(或10%甲醇水溶液)有助于降低水的表面张力,提高润湿效率,快速溶解析出盐,并有抑菌作用,有效期为两周。

c) 实验开始前确保柱塞密封清洗功能已打开,清洗液不可循环使用,随时观察泵清洗液是否充足,及时添加泵清洗液。

d) 柱塞密封清洗方法



Thermo Fisher、Waters液相内置程序自动开启;

Agilent需要手动打开,设置定期清洗每30min清洗0.1min;

Shimadzu液相需要手动清洗,使用的岛津液相每天使用注射器吸取清洗液冲洗2 min。

4.进样系统

4.1自动洗针功能

吸取样品时,进样阀处于旁路位置,自动洗针可以立即洗去针外表面上残留的样品,当进样阀转回到主流路时,定量管和针内所有的样品都被冲洗到色谱柱中。这种结合洗针和冲洗管路的设计可以把携留效应减低到最小的程度。

Thermo Fisher、Waters、Shimadzu及AgilentⅡ代液相的自动洗针功能,连接专门通路,自动填充溶剂清洗;AgilentⅠ代液相采用在液相小瓶中清洗的方式,需要设置清洗小瓶位置并且去掉小瓶的盖垫,防止少量样品留在密封垫上,造成污染。

洗针液以能溶解待测样品为宜,可有效减少残留污染。建议使用10%的甲醇或乙腈作为洗针液,Thermo Fisher液相使用D通道,即10%乙腈作为洗针液,对于特殊样品需要配制专门溶剂。

4.2计量装置

a)Thermo Fisher、Waters、Shimadzu液相采用计量注射器量取样品液,在运行前需要灌注注射器以排除注射器内气泡,以防计量不准;

b)Agilent液相采用计量泵方式,无注射器不需灌注。




5色谱柱

反相色谱柱维护,通常使用纯水和有机溶剂,水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂,而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物;

完全置换色谱柱中的流动相,需要至少十倍柱体积,一根常用的4.6×150mm和4.6×250mm的色谱柱柱体积大约分别是1.5mL、2.5ml,按照常用的1mL/min的流速,分别至少需要15min、25min的时间。

6紫外检测器


6.1流通池的清洗

在不连接色谱柱的情况下先用高纯水冲洗20分钟,然后用异丙醇(或5%硝酸,流通池污染严重时采用,慎用))冲洗2小时,最后用高纯水冲洗,可根据污染情况调整冲洗时间,若正常冲洗无效,反冲检测器。适用于VWD、DAD的流通池。

6.2流通池耐压

注意不同检测器流通池耐压问题,尽量避免使用pH>9.5的流动相,以防腐蚀流通池石英窗,避免使用可能析晶的流动相,防止流通池堵塞;VWD 40bar,DAD 120bar,MWD 120bar,FLD荧光 20bar,RID 示差5bar,RID、FLD永远是最后一个检测器。

6.3检测器灯维护

检测器的灯一般在流通池有溶液连续流出几分钟后再开启,若流通池中有气泡,则会提示漂移过大无法通过自检和校正;

检测器的氘灯或钨灯不可经常关闭,每开关一次灯的寿命损失约30小时,若仪器中途不需做样,可设置低流速,长时间不使用可关机。

7色谱系统

7.1仪器的过渡及流动相的过渡处理

a)使用仪器前,使用10%乙腈冲洗系统10~30min,当流动相含缓冲盐时,连接色谱柱,继续使用10%乙腈冲洗系统约20min(根据柱体积来确定过度时间,至少10倍柱体积),以置换色谱柱内保存液;

b)Purge注意事项

更换所需流动相,若流动相分别使用缓冲盐和纯有机相两个通道时,当purge完其中一个通道后,使用10%乙腈purge 2 min左右,再purge另外的一个通道,放置防止水相与有机相在比例阀至泵后管路中混合产生结晶堵塞管路;将两通道比例设置完成后关闭purge阀,开始平衡色谱柱;

c)仪器使用后,首先将使用到的管路放入10%乙腈中,使用10%乙腈冲洗色谱系统30~50min,更换为90%乙腈冲洗30min,使用两通替换色谱柱,将四个通道放入10%乙腈中或50%异丙醇中冲洗保存。

7.2仪器的清洗维护

a)液相的四个通道使用50%异丙醇冲洗过夜,在冲洗过程中每隔一段时间切换进样阀的主路和旁路,用于清洗六通阀,长时间未清洗的仪器可以适当提高异丙醇比例。

b)当进样的样品浓度较高时,设置洗针序列,进样10%有机相(可根据样品溶解度选择合适的洗液,一般不含盐),两分钟进样一次,运行10针以上,可以冲洗干净。

7.3色谱用溶液、溶剂污染防范

a)各(色谱)试剂只能倒出,不得用器具移取或者将剩余倒回;

b)将甲醇、乙腈可倒入小体积溶剂瓶或烧杯中,方便使用且避免污染;

c)当稀释剂中含有机相时,避免使用塑料滴管,防止有机相溶解塑料在色谱系统中产生鬼峰;

d)溶剂瓶注意封口,当两个通道放入一个瓶中时,使用封口膜密封,防止异物(注意封口膜老化掉入)落入其中。

7.4捕集小柱使用注意

捕集小柱可有效避免流动相中的杂质对基线的干扰,主要应用于梯度洗脱体系中;

冲洗过渡色谱系统后,首先使用梯度流动相中有机相比例最大的比例冲洗系统至基线平衡,再更换为初始比例,时间为梯度中设置的平衡时间,不管是否平衡,立即运行序列,空白进至少3针保证系统平衡。

7.5常见问题解析

保留时间不稳定

a)首先观察保留时间是否有规律的变化,并同时观察压力是否稳定;

b)若压力稳定而保留时间呈有规律变化,多数是色谱柱未平衡好,特别是含有盐的流动相,需较长的时间去平衡;

c)若压力稳定而保留时间无规律变化,请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞,再平衡色谱柱足够时间,如仍然不佳,可更换一色谱柱;

d)若压力不稳定,请检查造成压力不稳定的因素,如:漏液,排液时间不足够,盐浓度过高导致盐析,主动阀比例阀内漏等。

峰面积重现性不好

a)首先观察压力是否稳定,以及观察峰面积变化是否有规律。

b)若压力不稳定,请检查造成压力不稳定的因素,如漏液,排液时间不足够,盐浓度过高导致盐析,主动阀比例阀内漏等;

c)若压力稳定但峰面积呈无规律变化。请检查样品是否足够,确认样品的稳定性,必要时重新配制,检查进样阀是否漏液等;

d)若压力稳定且峰面积呈规律变化,多数为色谱柱未平衡好。

基线不稳定

a)基线漂移

色谱柱未平衡好,柱温未稳定,流动相变化等。

b)基线噪音

流动池有气泡,流通池污染;

色谱柱和或系统受污染;

灯能量不足,光路脏;

外界因素影响,如电源,温度和湿度、震动等。

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