51、通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂，无法考察组分的PKa值，哪我们如何去选择合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢？
答：如果天然产物中没有易电离的极性基团，就不需要用缓冲盐调节pH。如果天然产物中既有酸性基团，也有碱性基团，譬如有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的两性物质，建议将pH用磷酸盐缓冲盐控制在2.4（如果是诸如月旭的Ultimate LP-C18这样的耐酸色谱柱，还可以调得更低）。
如果pH控制在6.2-9.0之间，两个基团都处于离子态，保留能力差，是不可取的。如果不清楚复杂物质中含有什么基团，也请将pH调到2.4或更低。因为pH调低，起码抑制了酸性基团的电离而处于中性分子状态，而增加酸性基团这个部分在反相色谱中的保留能力；另外低pH还抑制了硅醇基的活性，有利于获取对称的峰形。
情况不明时候，为什么不建议调高pH呢？一方面一般色谱柱都不能承受pH9以上的条件；即使是像月旭的Xtimate系列一样能耐12.5的柱子，调高pH和调低pH相比，还有一个硅醇基活性大的劣势。
52、记得以前拿到C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，这样做的目的是什么呢？是先用溶剂活化吗？然后再用样品？还有测定短肽总是冲出来，该怎么解决呢？就是和溶剂峰出在一起，或者出在溶剂峰之前。
答：C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，因为色谱柱到达用户手中时，时间长短不一，在存储和运输的过程中，可能存储液有些挥发，低流速的甲醇可以很好的浸润固定相，使键合相很好的伸展，用溶剂平衡好系统后，可以采取多次进样或者加大进样量的方式以更快的获得重现的色谱图，这样用样品将色谱柱中的活化点饱和，就不会出现异常色谱现象的情况。
53、C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。
答：pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。
54、色谱柱的安装有什么技巧吗？只要保证不漏就行了吗？还有所谓的死体积怎么测定呢？
答：色谱柱安装技巧不多，只要接头和柱头匹配，确实拧紧不漏就可以了，但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积，一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积（色谱柱内溶剂能占据的空腔体积）和柱外体积两部分。
你从厂商这里买到色谱柱，柱体积已经是固定了，你能尽量避免减少的是柱外体积。进样器内死体积、毛细管长度、毛细管和色谱柱连接紧凑与否，保护柱或在线滤器产生的死体积大小，都对这个有影响。样品在柱内，除扩散外，还有和填料作用引起的组分分离；但样品在柱外，那就只有扩散这个使柱效下降的因素了。所以，要取得好的分离效率，柱外体积应该是越小越好。
峰有时候前延，有时候拖尾，一般不是色谱柱的问题，应该是样品和色谱柱填料的作用问题，可以说如果色谱柱类型选择没问题，关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成（包括添加剂）、流动相pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测定分子量较大的多肽，用样品老化平衡色谱柱很重要，分子量越大的物质，需要平衡时间越长。如果柱子没平衡好，峰形也可能会不正常。所以好把你具体的测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。
55、测定多肽样品时，十几肽或者二十几肽时，有时峰前延的比较厉害，有时峰拖尾比较厉害，这是什么原因呢？是样品的问题还是柱子的问题？
答：峰有时候前延，有时候拖尾，一般不是色谱柱的问题，应该是样品和色谱柱填料的作用问题，可以说如果色谱柱类型选择没问题，关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成（包括添加剂）、流动相pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测定分子量较大的多肽，用样品老化平衡色谱柱很重要，分子量越大的物质，需要平衡时间越长。如果柱子没平衡好，峰形也可能会不正常。所以好把你具体的测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。
56、柱子的平衡时间跟填料关系大吗？哪种快，哪种慢？因为我在做离子交换柱的时候平衡是相当的慢
答：根据色谱速率理论，粒径越小，柱效越高，而且当粒径小到亚2微米左右时，线速度的提高，其分离度就不再降低，从而改变了许久以来人们不得不在 “速度和分离度之间取舍”的局面。
57、关于配置流动相，有机相我们可以甲醇乙腈同时用，这个是基于什么考虑的？是不是根据甲醇乙腈选择性不同、样品在这个两者的溶解度的差异以及调节洗流动相脱能力来考虑的？
答：甲醇和乙腈同时用，可以获得单纯的甲醇或者乙腈不一样的选择性，而且洗脱能力也会改变，根据多元流动相的强度因素Sab.....=Saψa+Sbψb=...Sa和Sb纯溶剂a和b的溶剂强度因素；ψa、ψb分别为a和b的体积分数，所以在药典中有很多体系都使用甲醇乙腈体系；
58、三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相，柱压一天比一天高，该怎么样解决？
答：把柱子再生下，再生的方法搜一下有很多反冲对绝大部分色谱柱都是可行的,效果不错。
59、新出厂液相色谱柱，保护溶剂一般是什么？怎样进行平衡清洗比较好，一般要平衡多长时间比较好？
答：柱子类型不同，保存溶剂也会不一样吧，具体要看说明书的说明。对于反相柱，一般用甲醇（乙腈）保存，也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水保存的。一般用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可（注意：柱体积不等于空柱管体积，4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml，而柱体积只有约2.5ml）。
60、据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了，请问一般达到多高，用甲醇和乙腈是不是不一样？
答：柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素，分离度才是重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步，例如超过300bar，就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高，同样状况的柱子，如果用甲醇做流动相，柱压可能超了，换用乙腈会使柱压下降不少，仪器还能承受。不过尽管柱压还没上升到接近400Bar的限定，如果发现柱压上升速度较快，也需要及早对柱子进行清洗维护，从根本上排除导致柱压上升的源头。
61、柱塞板可不可拆下用超声波清洗，会有什么不良后果？
答：不建议将柱筛板拆下清洗，因为拆下承压的柱筛板会导致柱床发生变化，影响色谱性能。应该对污染的色谱柱行清洗维护，维护没有效果，再把拆洗柱筛板作为后的手段。
62、一般正常使用一个C18柱能用多长时间？
答：柱寿命一般不按时间计算，按持续进样针数比较科学。一般正常使用维护，不超过pH和温度等范围，C18柱能达到500-2000针进样的寿命，视样品干净程度的不同而不同。
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